|
Human Amylin ELISA KIT 96-Well Plate
(Cat. # EZHA-52K) 96-Well Plate (Cat. # Ezha-52K)
I. Intended Use I. Beoogd gebruik 2 2 II.
II. Principles Of Procedure Beginselen van procesrecht 2 2
III. III. Reagents Supplied Reagentia Geleverd 2 2
IV. IV. Storage and Stability Opslag en stabiliteit 3 3
V. Reagent Precautions V. Reagens Voorzorgsmaatregelen 3 3 VI. VI. Materials Required But Not Provided Benodigde maar niet bijgeleverde 3 3
VII. VII. Sample Collection And Storage Proef inzameling en opslag 4 4
VIII. VIII. Assay Procedure Gehalte Procedure 4 4 IX. IX. Microtiter Plate Arrangement Microtiterplaat Arrangement 5 5 X. Calculations X. Berekeningen 5 5 XI. XI. Assay Characteristics Gehalte Kenmerken 5 5
XII. XII. Troubleshooting Guide Troubleshooting Guide 8 8
XIII. XIII. Replacement Reagents Vervanging Reagentia 8 8 XIV. XIV. Ordering
Information Bestelinformatie 9 9 XV. XV. References Referenties 9 9 XVI. XVI.
Kits Available by Linco Research, Inc. Kits Beschikbaar per Linco Research, Inc
10 10
--------------------------------------------------------------------------------
Page 2 Page 2
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 2 2 Human Amylin ELISA KIT Human Amylin
ELISA KIT 96-Well Plate (Cat. # EZHA-52K) 96-Well Plate (Cat. # Ezha-52K) I. I.
INTENDED USE BESTEMMING This kit is for non-radioactive quantification of Human
Amylin in plasma. Deze kit is voor niet-radioactieve kwantificering van de mens
Amylin in het plasma. The capture antibody requires an Het capture antilichaam
vereist een intact disulfide bond between positions 2 and 7 of the peptide.
intact disulfide binding tussen posities 2 en 7 van het peptide. One kit is
sufficient to measure 39 unknown Een set is voldoende om 39 onbekende meten
samples in duplicate. This kit is for research purposes only. monsters in
tweevoud. Deze kit is alleen voor onderzoeksdoeleinden. II. II. PRINCIPLES OF
PROCEDURE BEGINSELEN VAN ORDE The Human Amylin ELISA is a monoclonal
antibody-based sandwich immunoassay for determining De Human Amylin Elisa is een
monoklonaal antilichaam-gebaseerde sandwich immunoassay voor de bepaling amylin
levels in human plasma. amyline niveaus in menselijk plasma. The capture
antibody recognizes human amylin, amylin acid (deamidated Het capture
antilichaam herkent menselijke amyline, amyline zuur (deamidated amylin), a 1-20
fragment of amylin, but not reduced amylin. amyline), een fragment van 1-20
amyline maar niet verminderd amyline. The detection antibody binds to reduced or
De detectie antilichaam bindt aan verminderd of unreduced human amylin but not
amylin acid and is complexed with streptavidin-alkaline phosphatase.
onverminderde amyline menselijk, maar niet amyline zuur en is gecomplexeerd met
streptavidine-alkalische fosfatase. The De substrate, 4-Methylumbelliferyl
Phosphate (MUP), is applied to the completed sandwich and the substraat,
4-Methylumbelliferyl fosfaat (MUP), wordt toegepast op de voltooide sandwich en
de fluorescent signal, monitored at 355 nm/460 nm, is proportional to the amount
of amylin present in the fluorescente signaal, nm/460 gecontroleerd op 355 nm,
is evenredig aan het bedrag van amyline aanwezig in de sample. monster. III.
III. REAGENTS SUPPLIED REAGENTIA GELEVERDE Each kit is sufficient to run one
96-well microtiter plate and contains the following reagents: Elke kit is
voldoende om een 96-run goed microtiterplaat en bevat de volgende reagentia: A.
A. Microtiter Plate Microtiterplaat Coated with Mouse anti-Human Amylin Antibody
Bekleed met muis anti-humaan antilichaam Amylin Quantity: 1 plate Hoeveelheid: 1
plaat Preparation: Ready to use Bereiding: Klaar voor gebruik B. B. Adhesive
Plate Sealer Plate Adhesive Sealer Quantity: 1 Sheet Aantal: 1 vel Preparation:
Ready to use Bereiding: Klaar voor gebruik C. C. Wash Buffer Concentrate 10X
Wash Buffer Concentraat 10X 10X concentrate of 50 mM Tris Buffered Saline with
Tween 20 and Sodium Azide 10X concentraat van 50 mM Tris-gebufferde
fysiologische zoutoplossing met Tween 20 en Natriumazide Quantity: 30 ml
Hoeveelheid: 30 ml Preparation: Dilute 1:10 with deionized water Bereiding:
verdunnen 1:10 met gede�oniseerd water D. D. Standards Normen Human Amylin in
Assay Buffer: 0, 1, 2, 5, 10, 40 and 100 pM Human Amylin in Gehalte Buffer: 0,
1, 2, 5, 10, 40 en 100 pm Quantity: Lyophilized, 250 �l /vial rehydrated Aantal:
Gelyofiliseerde, 250 ĩl / injectieflacon gerehydrateerd Preparation:
Reconstitute with 250 �l deionized water Bereiding: Bereid met 250 ĩl
gede�oniseerd water E. E. Controls 1 and 2 Controles 1 en 2 Human Amylin in
Assay Buffer. Human Amylin in Assay Buffer. Quantity: Lyophilized, 250 �l /vial
rehydrated Aantal: Gelyofiliseerde, 250 ĩl / injectieflacon gerehydrateerd
Preparation: Reconstitute with 250 �l deionized water Bereiding: Reconstitueer
met 250 ĩl gede�oniseerd water F. F. Assay Buffer Gehalte Buffer 0.05M PBS, pH
7.4, containing Proprietary Protease Inhibitors, with Tween 20, 0.05M PBS, pH
7.4, met Eigendom proteaseremmers, met Tween 20, 0.08% Sodium Azide and 1% BSA
0,08% Natriumazide en 1% BSA Quantity: 6 ml Aantal: 6 ml Preparation: Ready to
use Bereiding: Klaar om te gebruiken
--------------------------------------------------------------------------------
Page 3 Page 3
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 3 3 G. G. Detection Antibody
Detectieantilichaam Anti-Human Amylin-Alkaline Phosphatase Conjugate Anti-Human
Amylin-alkaline fosfataseconjugaat Quantity: 11 ml Hoeveelheid: 11 ml
Preparation: Ready to use Bereiding: Klaar voor gebruik H. H. Substrate (Light
sensitive, avoid unnecessary exposure to light) Substraat (Licht gevoelig,
onnodige blootstelling aan licht) 4-Methylumbelliferyl Phosphate
4-Methylumbelliferyl Fosfaat Quantity: 10 mg Hoeveelheid: 10 mg Preparation :
Hydrate in 1 ml deionized water just before use. Bereiding: Hydrate in 1 ml
water gede�oniseerd vlak voor gebruik. Use at 1:200 dilution in substrate
Gebruik op 1:200 verdunning in substraat diluent (eg 105 �l hydrated substrate
in 20 ml substrate diluent). oplosmiddel (bv. 105 ĩl gehydrateerd substraat in
20 ml oplosmiddel substraat). I. I. Substrate Diluent (Light sensitive, avoid
unnecessary exposure to light) Substraat Diluent (Licht gevoelig, onnodige
blootstelling aan licht) Quantity: 21 ml Hoeveelheid: 21 ml Preparation: Ready
to use, warm to room temperature before use Bereiding: Klaar voor gebruik, op
kamertemperatuur v��r gebruik J. J. Stop Solution Stop Solution Quantity: 6 ml
Aantal: 6 ml Preparation: Bring to room temperature before use. Bereiding: Breng
op kamertemperatuur v��r gebruik. Mix thoroughly to ensure no precipitate Meng
grondig te zorgen geen neerslag remains. blijft. IV. IV. STORAGE AND STABILITY
OPSLAG EN STABILITEIT Upon receipt, all components of the kit should be stored
at 2-8�C. Na ontvangst moeten alle componenten van de kit worden bewaard bij 2-8
� C. Do not mix reagents from different kits Niet reagentia mix van
verschillende kits unless they have the same lot numbers. tenzij zij dezelfde
partij nummers. V. V. REAGENT PRECAUTIONS REAGENT VOORZORGSMAATREGELEN A. A.
Diethanolamine Diethanolamine Substrate diluent contains diethanolamine.
Substraat oplosmiddel bevat diethanolamine. This compound can be harmful through
ingestion, Deze verbinding kan schadelijk zijn via voeding, inhalation, and skin
contact. inademing en contact met de huid. May be irritating to eyes and skin.
Mag irriterend voor de ogen en de huid. If skin/eye contact occurs flush Als de
huid en / of oogcontact plaatsvindt spoelen thoroughly with water. grondig met
water. B. B. Sodium Azide Natriumazide Sodium Azide has been added to reagents
as a preservative at a concentration of 0.08%. Natriumazide is toegevoegd aan
reagentia als conserveermiddel in een concentratie van 0,08%. Although it is
Hoewel het at a minimum concentration, Sodium Azide may react with lead and
copper plumbing to form highly bij een minimale concentratie kan, Natriumazide
reageren met lood en koperen leidingen, zeer vorm explosive metal azides.
explosieve metaal aziden. On disposal, flush with a large volume of water to
prevent azide build up. Bij verkoop, spoelen met een grote hoeveelheid water om
te voorkomen azide bouwen. VI. VI. MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED MATERIAAL
MAAR NIET VOORZIEN 1. 1. Pipet with Tips, 10�l-200�l Pipetteer met tips,
10μl-200μl 2. 2. Multi-Channel Pipette, 50�l-300�l Multi-Channel Pipetteer,
50μl-300μl 3. 3. Buffer and Reagent Reservoirs Buffer en Reagens Reservoirs 4.
4. Vortex Mixer Wervelmenger 5. 5. Absorbent Paper or Cloth Absorberend papier
of doek 6. 6. Refrigerator Koelkast 7. 7. Deionized Water Gede�oniseerd water 8.
8. Orbital Microtiter Plate Shaker Orbital microtiterplaat Shaker 9. 9.
Fluorescence Plate Reader Fluorescentie Plate Reader
--------------------------------------------------------------------------------
Page 4 Pagina 4
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 4 4 VII. VII. SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
MONSTER verzameling en opslag 1. 1. For plasma collection, collect whole blood
in ice-cooled Vacutainer� EDTA-plasma tubes. Voor plasma inzamelen, verzamelen
volbloed in ijs-gekoelde Vacutainer � EDTA-plasma buizen. Centrifuge immediately
at 1000 xg for 10 minutes in refrigerated centrifuge or place tubes on ice and
Centrifugeer onmiddellijk bij 1000 xg gedurende 10 minuten in gekoelde
centrifuge of plaats buisjes op ijs en centrifuge within one hour. centrifuge
binnen een uur. 2. 2. Specimens should be stored at less than or equal to -70�C.
Specimens moeten worden opgeslagen op minder dan of gelijk aan -70 � C. Aliquot
samples before freezing if Analysehoeveelheden voor het invriezen als necessary.
noodzakelijk. 3. 3. Avoid using samples with gross hemolysis or lipemia. Vermijd
het gebruik van monsters met een bruto hemolyse of lipemia. VIII. VIII. ASSAY
PROCEDURE TEST PROCEDURE The assay should be run in duplicate using 50 �l Assay
Buffer and 50 �l of Standard, Control, or Sample in De test moet worden
uitgevoerd in tweevoud behulp van 50 ĩl Gehalte buffer en 50 ĩl van Standard,
Control, of monster each well. elk putje. 1. 1. Dilute the concentrated TBS Wash
Buffer 10 fold by mixing the entire contents of the 10X Wash Verdun de
geconcentreerde TBS Wash Buffer 10 maal, door het mengen van de volledige inhoud
van de 10X Wash Buffer with 270 ml deionized water. Buffer met 270 ml
gede�oniseerd water. 2. 2. Reconstitute Standards and QC1 and QC2 (lyophilized)
vials with 250 �l of deionized water. Reconstitueer Normen en QC1 en QC2 (gevriesdroogde)
injectieflacons met 250 ĩl gede�oniseerd water. Mix Mix gently and let sit for
at least 5 minutes with occasional gentle mixing to assure complete
reconstitution. rustig zitten en laat minstens 5 minuten met af en toe zachtjes
mengen tot volledig oplossen verzekeren. 3. 3. Remove the microtiter assay plate
from the foil pouch and fill each well with 300 �l of diluted TBS Verwijder de
microtiterplaatschudder test plaat uit de folieverpakking en elk goed vullen met
300 ĩl verdunde TBS Wash Buffer. Wash Buffer. Incubate at room temperature for
10 minutes, no shaking. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten, nee
schudden. 4. 4. Decant Wash Buffer from the plate and re move the residual
amount from all wells by inverting the Decanteer Was Buffer van de plaat en weer
bewegen de resterende bedrag van alle putjes door omkeren van de plate and
tapping it smartly onto absorbent towels several times. plaat en tikken het slim
op absorberende handdoeken een paar keer. Do not let wells dry before Laat
waterputten drogen voordat proceeding to the next step. gaan tot de volgende
stap. 5. 5. Add 50 �l Assay Buffer to each well. Voeg 50 ĩl Gehalte buffer aan
elke well. 6. 6. Add in duplicates; 50 �l Standards, Samples and Controls.
Add-in duplo, 50 ĩl Normen, monsters en controles. Refer to Section IX for
suggested well Zie sectie IX voor suggereerde goed orientations. ori�ntaties.
Seal plate and incubate at room temperature on the shaker for one hour. Seal
plaat en incuberen bij kamertemperatuur op de shaker voor een uur. ( NOTE: Start
(NB: Start incubation time as plate is loaded on the shaker, not from the time
you start loading the plate incubatie tijd als plaat wordt geladen op de shaker,
niet vanaf het moment dat u begint met het laden van de plaat with samples. )
Decant and remove the residual amount from all wells by inverting the plate and
met samples.) Giet en verwijder het resterende bedrag van alle putjes door
omkeren van de plaat en tapping it smartly onto absorbent towels several times.
tikken op het slim op absorberende handdoeken een paar keer. 7. 7. Wash the
plate 3 times with 300 �l per well TBS Wash Buffer. Was de plaat 3 maal met 300
ĩl per well TBS Wash Buffer. Decant and tap after each wash to Decanteer en tik
na elke wasbeurt aan remove residual buffer. verwijderen resterende buffer. 8.
8. Add 100 �l Detection Antibody to each well. Voeg 100 ĩl detectieantilichaam
voor elke well. Cover the plate with sealer and incubate on the shaker at Bedek
de plaat met sealer en broeden op de shaker op room temperature for 2 hours.
kamertemperatuur gedurende 2 uur. 9. 9. Near the completion of this incubation
step, hydrate the Substrate (ESS-MUP) by adding 1 ml Bij de voltooiing van deze
stap incubatie, hydraat het substraat (ESS-MUP) door toevoeging van 1 ml
deionized water to 10 mg, mix well, and let stand 15 minutes (with occasional
mixing) to assure gede�oniseerd water tot 10 mg, meng goed en laat 15 minuten
staan (met af en toe menging) te verzekeren complete dissolution. volledig is
opgelost. Remove 105 �l from the reconstituted substrate and add it to the 21 ml
vial of Verwijder 105 ĩl van de gereconstitueerde substraat en voeg deze toe aan
de 21 ml flacon Substrate Diluent (EDD-MUP), mix well. Substraat Diluent (EDD-MUP),
meng goed. Referred to as Substrate Solution from here on. Bedoeld als substraat
oplossing van hier op. 10. 10. Decant Detection Antibody and remove the residual
amount from all wells by inverting the plate and Decanteer detectieantilichaam
en verwijder het resterende bedrag van alle putjes door omkeren van de plaat en
tapping it smartly onto absorbent towels several times. tikken op het slim op
absorberende handdoeken een paar keer. 11. 11. Wash the plate 3 times with 300
�l per well TBS Wash Buffer. Was de plaat 3 maal met 300 ĩl per well TBS Wash
Buffer. Decant and tap after each wash to Decanteer en tik na elke wasbeurt aan
remove residual buffer. verwijderen resterende buffer. 12. 12. Add 100 �l
Substrate Solution to each well. Voeg 100 ĩl Substraat Antwoord op elke well.
Incubate 15 minutes at room temperature in the dark, no Incubeer 15 minuten bij
kamertemperatuur in het donker, geen shaking. schudden. 13. 13. Take a reading.
Neem een lezing. Note the RFU of the top standard point; when the reading is
2000 RFU or greater, add Let op de RFU van de top-norm punt; wanneer de lezing
is 2000 RFU of hoger, toe te voegen 50 �l Stop Solution (ET-AP), gently mix, and
read on the Fluorescence Plate reader after 5 minutes. 50 ĩl Stop Solution
(ET-AP), meng, en lees over de fluorescentie Plate lezer na 5 minuten.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 5 Page 5
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 5 5 IX. IX. MICROTITER PLATE ARRANGEMENT
Microtiterplaat ARRANGEMENT 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10 11 11 12
12 A Een 0 pM 0 pM 0 pM 0 pM 1 pM 1 pM 1 pM 1 pM 2 pM 2 pM 2 pM 2 pM 5 pM 5 pM 5
pM 5 pM 10 pM 10 pM 10 pM 10 pM 40 pM 40 pM 40 pM 40 pM B B 100 pM 100 pm 100 pM
100 pm QC 1 QC 1 QC 1 QC 1 QC 2 QC 2 QC 2 QC 2 Sample 1 Monster 1 Sample 1
Monster 1 Sample 2 Monster 2 Sample 2 Monster 2 Etc. Etc C C D D E E F F G G H H
X. X. CALCULATIONS BEREKENINGEN The RFU can be fitted directly to the
concentration. De RFU kan direct worden gemonteerd op de concentratie. If curve
fitting software is available, the best fit Als curve fitting software
beschikbaar is, de best passende can be obtained with a linear-linear spline
fit. kan worden verkregen met een lineaire-lineaire spline fit. Since this assay
is a direct ELISA, the RFU is directly proportional to the concentration of
Human Aangezien deze test is een directe ELISA, is de RFU rechtstreeks evenredig
met de concentratie van de Mens Amylin in the sample. Amylin in het monster.
Note: When sample volumes assayed differ from 50 �l, an appropriate mathematical
adjustment Opmerking: Als monster kwantitatief bepaald volume verschillen van 50
ĩl, een passende wiskundige aanpassing must be made to accommodate for the
dilution factor (eg, if 25 �l of sample is used, then calculated moet worden
gedaan om tegemoet voor de verdunningsfactor (bijvoorbeeld als 25 ĩl van het
monster wordt gebruikt, dan berekend data must be multiplied by 2). gegevens
moeten worden vermenigvuldigd met 2). XI. XI. ASSAY CHARACTERISTICS TEST
KENMERKEN Sensitivity Gevoeligheid The lowest level of Human Amylin that can be
detected by this assay is 1 pM (50 �l plasma sample Het laagste niveau van de
mens Amylin die kan worden gedetecteerd door deze test is 1 uur (50 ĩl plasma
monster size). grootte). Performance Prestatie ED ED 80 80 = 84 � 2 pM = 84 � 2
pM ED ED 50 50 = 60 � 4 pM = 60 � 4 pM ED ED 20 20 = 32 � 3 pM = 32 � 3 pM
Crossreactivity Crossreactivity Human Glucagon Human Glucagon <1% <1% Human
GLP-1 Human GLP-1 <1% <1% Human Insulin Humane insuline <1% <1% Human Pancreatic
Polypeptide Human Alvleesklier Polypeptide <1% <1% Human Adrenomedullin Human
Adrenomedullin 1% 1% Human Calcitonin Human Calcitonine <1% <1% Calcitonin Gene
Related Peptide Calcitonine Gene Related Peptide <1% <1% Note: This kit is
suitable for the measurement of Amylin in Opmerking: Deze kit is geschikt voor
het meten van Amylin in rat and feline plasma; however, the precise percent of
ratten en katten plasma, maar de precieze procent van de cross-reactivity is not
determined at this time. kruisreactiviteit is niet bepaald op dit moment.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 6 Page 6
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 6 6 Precision Precisie Within and Between
Assay Variation Binnen en tussen Assay Variatie Sample Monster Amylin Added
Amylin Added Within Binnenin Between Tussen No. Aantal pM pM % CV % CV % CV % CV
1 1 20 20 1.8 1,8 5.9 5,9 50 50 1.6 1,6 6.0 6,0 80 80 1.2 1,2 3.7 3,7 2 2 20 20
2.2 2,2 4.9 4,9 50 50 1.2 1,2 6.1 6,1 80 80 1.9 1,9 3.7 3,7 3 3 20 20 1.7 1,7
4.6 4,6 50 50 3.4 3,4 6.9 6,9 80 80 1.9 1,9 4.8 4,8 The assay variation of Linco
Human Amylin ELISA kits were studied at three different spiked De assay variatie
van de mens Linco Amylin ELISA kits werden bestudeerd op drie verschillende
spiked concentrations of Amylin in three different human plasma samples.
concentraties van Amylin in drie verschillende menselijk plasma monsters. The
within variation is the mean De variatie is binnen de gemiddelde from four
duplicate determinations in a single assay. vier duplo-metingen in een enkele
test. The between variation is the mean value of the De variatie is tussen de
gemiddelde waarde van de mean of four duplicate determinations in each plasma
across six assays. gemiddelde van vier duplo-bepalingen in elke plasma in zes
assays. Recovery Recovery Spike & Recovery of Human Amylin in Human Plasma Suske
& Herstel van de mens Amylin in menselijk plasma Sample Monster # # Sample
Monster Concentration Concentratie (pM) (pm) Amylin Amylin Added Toegevoegd (pM)
(pm) % of % Van Recovery Recovery 6.14 6,14 20 20 92 92 50 50 93 93 1 1 80 80 94
94 5.75 5,75 20 20 97 97 50 50 96 96 2 2 80 80 96 96 6.85 6,85 20 20 99 99 50 50
99 99 3 3 80 80 97 97 Varying concentrations of Human Amylin were added to three
human plasma samples and the amylin Verschillende concentraties van de mens
Amylin werden toegevoegd aan de drie menselijke plasma-monsters en de amyline
content was determined in six different ELISA assays. De inhoud was bepaald in
zes verschillende ELISA-tests. The % of recovery = observed amylin Het% van de
terugvordering = waargenomen amyline concentration/expected amylin concentration
x 100%. concentratie / verwacht amyline concentratie x 100%.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 7 Page 7
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 7 7 Linearity Lineariteit Effect of Plasma
Dilution Effect van Plasma Verdunning Sample Monster Volume Deel Expected
Verwachte Observed Waargenomen % Of % Van No. Aantal Sampled Sampled pM pM pM pM
Expected Verwachte 1 1 50 �l 50 ĩl 27.9 27,9 27.9 27,9 100 100 40 �l 40 ĩl 27.2
27,2 97 97 25 �l 25 ĩl 30.7 30,7 110 110 10 �l 10 ĩl 33.1 33,1 118 118 2 2 50 �l
50 ĩl 16.6 16,6 16.6 16,6 100 100 40 �l 40 ĩl 16.9 16,9 102 102 25 �l 25 ĩl 16.1
16,1 97 97 10 �l 10 ĩl 10.7 10,7 64 64 3 3 50 �l 50 ĩl 33.4 33,4 33.3 33,3 100
100 40 �l 40 ĩl 32.6 32,6 98 98 25 �l 25 ĩl 25.2 25,2 76 76 10 �l 10 ĩl 22.6
22,6 68 68 Three human plasma samples with the indicated sample volumes were
assayed in six different assays. Drie menselijk plasma monsters met de
aangegeven monster volumes kwantitatief bepaald in zes verschillende tests.
Required amount of assay buffer was added to compensate for lost volumes below
50 �l. Benodigde hoeveelheid assay buffer werd toegevoegd als compensatie voor
de verloren hoeveelheden van minder dan 50 ĩl. The De resulting dilution factors
of 1.0, 1.25, 2.0, and 5.0 representing 50 �l, 40 �l, 25 �l, and 10 �l sample
gevolg verdunningsfactoren van 1.0, 1.25, 2.0, en 5.0 die 50 ĩl, 40 ĩl, 25 ĩl en
10 ĩl monster volumes assayed, respectively, were applied in the calculation of
observed amylin concentrations. volumes kwantitatief bepaald, werden toegepast
in de berekening van de waargenomen amyline concentraties. % expected =
observed/expected x 100%. % Verwacht = waargenomen / verwachte x 100%.
--------------------------------------------------------------------------------
Page 8 Page 8
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 8 8 XII. XII. Troubleshooting Guide
Troubleshooting Guide Low or No Signal with Standards Laag of geen signaal aan
de normen * Insufficient time for reaction with substrate. * Onvoldoende tijd
voor reactie met substraat. Allow substrate to react longer. Laat substraat om
langer te reageren. * Kit reagents have expired. * Kit reagentia zijn verstreken.
* Inadequate plate washing after sample incubation. * Onvoldoende plaat wassen
na incubatie monster. * Too much washing after conjugate incubation can reduce
signal. * Te veel wassen na conjugaat incubatie kan verminderen signaal. High
Background Hoog Achtergrond * Inadequate plate washing. * Onvoldoende plaat
wassen. After conjugate incubation, tap out plate on absorbent towels after Na
conjugaat incubatie, tikt out plaat op absorberende handdoeken na decanting.
decanteren. * Plate was not kept in dark after substrate addition. * Plaat werd
niet bewaard in een donkere ondergrond na toevoeging. * Cross contamination
between neighboring wells. * Cross besmetting tussen naburige putten. *
Substrate has been diluted too long or exposed to light before use, or diluent
has been * Ondergrond is verdund te lang of blootgesteld aan licht voor gebruik,
of verdunningsmiddel is contaminated with old substrate. verontreinigd met oude
substraat. Samples too High Monsters te hoog * Dilute sample with Assay Buffer
to bring Human Amylin concentration within standard range. * Verdun het monster
met Gehalte Buffer Human Amylin concentratie brengen standaard binnen bereik.
Signal too High on Highest Standard Signaal te hoog op de hoogste standaard *
Plate incubated too long with substrate. * Plate ge�ncubeerd te lang met
substraat. Discard substrate, wash plate once and add freshly Gooi substraat,
wassen plaat eens en voeg vers prepared substrate. bereid substraat. Check RFU
in less time. Check RFU in minder tijd. High Variance in RFU of Duplicates Hoge
Variatie in RFU van duplicaten * Cross contamination in wells * Kruisbesmetting
in putten * Bubbles in substrate at time of reading * Bubbles in de ondergrond
op het moment van het lezen * Loss of reagent or faulty pipetting in duplicates
* Verlies van reagens of gebrekkige pipetteren in duplo XIII. XIII. REPLACEMENT
REAGENTS VERVANGING REAGENTIA Reagents Reagentia Cat. Kat. # # Microtiter Plates
Microtiterplaten EP52 EP52 Adhesive Plate Sealer Plate Adhesive Sealer Wash
Buffer Concentrate 10x Wash Buffer Concentraat 10x EWB-TR EWB-TR Standards
Normen E8051-K E8051-K ELISA Quality Controls 1 & 2 ELISA Quality Controls 1 & 2
E6051 E6051 Assay Buffer Gehalte Buffer AB-A AB-A Detection Conjugate Detectie
Conjugate E1051 E1051 Substrate Substraat ESS-MUP ESS-MUP Substrate Diluent
Substraat Diluent EDD-MUP EDD-MUP Stop Solution Stop Solution ET-AP ET-AP
--------------------------------------------------------------------------------
Page 9 Page 9
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 9 9 XIV. XIV. ORDERING INFORMATION
BESTELINFORMATIE XV. XV. REFERENCES REFERENTIES 1. 1. Tijsen P. �Practice and
Theory of Enzyme Immunoassays� in Bu rdon RH and Tijsen P. "Praktijk en theorie
van Enzym Immunoassays in Bu rdon RH en Knippenberg PH (Ed.), Laboratory
Techniques in Biochemistry and Molecular Knippenberg PH (Ed.), Laboratorium
technieken in de Biochemie en Moleculaire Biology. Biologie. Amsterdam/NY:
Elsevier, 1985 Amsterdam / New York: Elsevier, 1985 2. 2. Christopoulos TK and
Diamandis EP. Christopoulos Diamandis TK en EP. �Fluorescence Immunoassays� in
Diamandis EP and "Fluorescentie Immunoassays" in Diamandis EP en Christopoulos
TK (Ed.), Immunoassay. Christopoulos TK (Ed.), Immunoassay. Academic Press, 1996
Academic Press, 1996 3. 3. Percy A, Rittenhouse J, Trainor D, Phelps J, and Koda
J.: Development of Sensitive Immunoassays to Percy A, Rittenhouse J, Trainor D,
Phelps J en J. Koda: Ontwikkeling van Sensitive Immunoassays aan Detect Amylin
and Amylin-Like Peptides in Untreated Plasma. Detect Amylin en Amylin-Like
Peptiden in Onbehandeld Plasma. Clinical Chemistry 42:4 , pp 576-585 Clinical
Chemistry 42:4, pp 576-585 4. 4. Phelps, et al., �Development and
Characterization of Monoclonal Antibodies Specific for Amylin� Phelps, et al..,
"Ontwikkeling en karakterisering van monoklonale antilichamen Specifiek voor
Amylin" Hybridoma. Hybridoma. Vol 15 No 5, pp 379-386 Vol 15 No 5, pp 379-386
--------------------------------------------------------------------------------
Page 10 Page 10
EZHA-52K-10/05/01 EZHA-52K-10/05/01 10 10 XVI. XVI. KITS AVAILABLE FROM LINCO
RESEARCH, INC. KITS BESCHIKBAAR VANAF Linco RESEARCH, INC Human Leptin Human
Leptine Human Insulin Specific Menselijke insuline Specifieke Sensitive Human
Leptin Gevoelige Human Leptine Ultra Sensitive Human Insulin Ultra Sensitive
menselijke insuline Mouse Leptin Muis Leptine Human Proinsulin Mens de pro Multi
Species Leptin Multi Soort Leptine Canine C-Peptide Canine C-Peptide Rat Leptin
Rat Leptine Human C-Peptide Human C-peptide Primate Leptin Primate Leptine
Porcine C-Peptide Varkens C-Peptide Rat Insulin Rat Insuline Rat C-Peptide Rat
C-Peptide Sensitive Rat Insulin Gevoelige Rat Insuline Glucagon Glucagon Porcine
Insulin Varkens Insuline Glucagon Like Peptide-1 (Total) Glucagon-like peptide-1
(Totaal) Lispro Insulin Insuline lispro Glucagon Like Peptide-1 (Active)
Glucagon-like peptide-1 (Actief) RIA or ELISA RIA of Elisa
Send mail to [email protected] with questions or comments about this web site.Copyright � 2009 GENTAUR Last modified: 03/02/10 |